抑菌圈主要與藥敏試驗有關(guān)，是利用待測藥物在瓊脂平板中擴散使其周圍的細(xì)菌生長受到抑制而形成透明圈，即抑菌圈。通過抑菌圈大小可以判定待測藥物抑菌效價。那么怎樣才能出現(xiàn)明顯的抑菌圈呢，下面我們來具體說說。
產(chǎn)生抑菌圈的方法主要有紙片擴散法(K-B法)、牛津杯法和打孔法三種。以教學(xué)中比較常做實驗的K-B法為例，先了解一下哪些因素會影響試驗結(jié)果，再針對性地解決，使得到明顯的抑菌圈。
1.藥敏紙片：紙片選用直徑6.00~6.35mm，吸水量為20ul的專用藥敏紙片。紙片的選擇會影響藥物擴散和細(xì)菌生長。含藥紙片一般密封貯存在2~8℃，不超過一周，所以使用前應(yīng)當(dāng)提前從冰箱取出平衡室溫至少10min后再打開，避免因冷凝水影響藥效，影響結(jié)果。
2.菌液：配制菌液的前提是保證菌液的純度，以免混入其他菌；另外濃度的配制一般是選擇麥?zhǔn)媳葷岱ǎ{(diào)成0.5麥?zhǔn)蠁挝坏臉?biāo)準(zhǔn)菌液濃度。所以配制濃度時應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格對照，濃度太高或太低對實驗有影響。
3.培養(yǎng)基：選擇水解酪蛋白培養(yǎng)基(M-H)，為兼性厭氧菌和需氧菌藥敏試驗標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基，一般4℃保存。
以上的材料準(zhǔn)備，如果是學(xué)校的實驗課程，一般有的實驗老師會直接幫忙準(zhǔn)備好。
4.細(xì)菌接種：用無菌棉拭子蘸取已校正濃度的菌液，在管壁擠掉多余菌液。涂布整個培養(yǎng)基表面，每次將平板旋轉(zhuǎn)60°，涂抹三次，較后沿周邊擦繞兩圈，以保證菌液涂抹均勻。這樣才能使使抑菌圈顯現(xiàn)明顯，試驗結(jié)果不會出現(xiàn)較大的偏差。
5.貼藥敏片：涂菌后放置15min使平板上的水分被瓊脂*吸收后，才能貼藥敏紙片。這個時間不能過長，否則會使細(xì)菌產(chǎn)生耐藥。
①貼藥敏紙片時，每取一種藥敏紙片必須燒一下鑷子口，避免藥敏紙片之間相互混淆，以提高藥敏的準(zhǔn)確性。
②兩紙片之間距離不小于24mm，紙片距平板邊緣不小于15mm，以免得到的抑菌圈交叉或者不完整。
③紙片貼后不可再拿起，放下后輕壓使藥敏紙片貼合在平板上。可以在還未貼之前在培養(yǎng)基底部量好距離，確定好紙片放置位置。
④將平板翻轉(zhuǎn)放置。
6.恒溫箱培養(yǎng)：35℃恒溫箱培養(yǎng)18~24小時。放置的時候記得放置平穩(wěn)。
整個流程里面比較會影響實驗結(jié)果的就差不多這些了，任何實驗都存在不可控的誤差，只有操作得當(dāng)，結(jié)果才能更好。
以上方法可以出現(xiàn)較明顯的抑菌圈，希望能幫助大家更好地進行實驗。
更新時間：2024-04-15 
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